• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        酶溶法

        相关实验:细胞破碎和蛋白质溶解实验

        最新修订时间:

        原理

        酶溶法就是用生物酶将细胞壁和细胞膜消化溶解的方法。因此利用此方法处理细胞必须根据细胞的结构和化学组成选择适当的酶。常用的有溶菌酶、β-1,3-葡聚糖酶、β-1,6-葡聚糖酶、蛋白酶、甘露糖酶、糖苷酶、肽链内切酶、壳多糖酶等、细菌主要用溶菌酶处理,酵母需要用几种酶进行复合处理。使用溶酶系统时要注意控制温度、酸碱度、酶用量、先后次序及时间。这里仅以溶菌酶处理大肠杆菌为例,介绍具体体方法如下。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒

        步骤

        1. 混悬洗过的大肠杆菌于 TE 缓冲液内,每克细菌需 3 ml 缓冲液。调整温度至 20℃~37℃;


        2. 每 5 ml 混悬液加入1 mg 溶菌酶,可以从新配制 10 mg/ml 的母液吸取或直接用酶的冻干粉;


        3. 在 20℃~37℃ 温育 10~20 min,同时轻轻摇动。

        注意事项

        1. 增加溶菌酶的浓度,如高达 10 mg/ml,能更快的溶解细菌,用更高的浓度甚至在 4℃ 作用 5 min 即可获得满意的溶解。


        2. 虽然酶溶法有选择性释放产物、核酸泄出量少、细胞外形完整等优点,但它也存在明显不足:如酶价格高、通用性差、有时存在产物抑制。


        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序