• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        脐血来源胚胎样干细胞的分离

        相关实验:脐血脐带中干细胞分离实验

        最新修订时间:

        原理


        材料与仪器

        步骤

        (a)分离和制备CB-MNCs。


        (b)根据以下免疫磁珠分选的方法纯化原始系限制性干细胞。


        (c)用2%HAG处理MNCs,4℃放置20 min。


        (d)用小鼠抗人CD45,CD33,CD37和抗血型糖蛋白A单克隆抗体标记MNCs,4℃标记30 min。


        (e)用ACD-A缓冲液洗细胞,400g,4℃离心10 min。


        (f)用ACD-A缓冲液再洗一遍。


        (g)用磁珠标记的人IgG4抗总小鼠IgG单克隆抗体标记MNCs 30 min。


        (h)根据产品说明书用磁分离器分离系特异性分子阴性(Lin-)的细胞群体。


        (i)按以下步骤安装细胞分离装置和硅酮管:用70%乙醇灌洗10min。用水洗两遍,每次5 min。用5%BSA/PBSA润洗。用弹簧夹夹住硅酮管的下段,用带子将硅酮管安全地固定在磁分离器中。


        (j)分离细胞前,用培养基加满细胞分离装置中的硅酮管,使通过柱子的流速控制在5mL/min以内。然后,用微量吸管将细胞/磁珠混合悬液加到管中,刚好低于液体的弯月面。


        (k)用巴氏吸管,不断添加培养基,防止管上的细胞脱水。


        (l)用15mL离心管收集流出的部分(含没有结合磁珠的细胞,Lin-细胞)。


        (m)用台盼蓝染色进行活细胞计数。


        (n)用含TPOFLK细胞因子混合物的培养基将UCB来源的Lin细胞接种到没有包被过的6孔培养板中,接种浓度为2.7×104个细胞/mL。


        (o)将细胞在37℃,5% CO2的条件下培养,每周一次更换培养基和细胞因子。


        (P)必要时,用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化贴壁细胞,按1×105个细胞/mL浓度接种到新培养瓶中,按上述条件继续培养细胞。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序