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        脐血脐带中干细胞分离实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        来源:《人干细胞培养》

        来源:丁香实验

        操作方法

        非限制性体干细胞(unrestricted somatic stem cells,USSCs)的分离

        (a)制备和分离脐带血来源的MNCs(CB-MNCs)。(b)如果使用冻存的CB-MNCs,复苏的细胞可以用于培养,不需要其他分离步骤。(c)用起始培养基按5×106〜7×106个细胞/mL浓度接种到T25的培养瓶中。(d)将细胞在37℃,5% CO2的条件下培养,2〜4周内每周一次更换培养基和细胞因子。(e)形成USSC集落后,在扩增培养基中扩增细胞。(f)将细胞在37℃,5% CO2的条件下培

        脐血来源胚胎样干细胞的分离

        (a)分离和制备CB-MNCs。(b)根据以下免疫磁珠分选的方法纯化原始系限制性干细胞。(c)用2%HAG处理MNCs,4℃放置20 min。(d)用小鼠抗人CD45,CD33,CD37和抗血型糖蛋白A单克隆抗体标记MNCs,4℃标记30 min。(e)用ACD-A缓冲液洗细胞,400g,4℃离心10 min。(f)用ACD-A缓冲液再洗一遍。(g)用磁珠标记的人IgG4抗总小鼠IgG单克隆抗体标

        脐血来源多能前体细胞的分离

        (a)分离和制备脐血来源的MNCs。(b)如果使用冻存的CB-MNCs,复苏的细胞可以用于培养,不需要其他分离步骤。(c)细胞复苏后在30 min内,用台盼蓝染色进行活细胞计数。(d)将在培养基中的CB-MNCs接种到T25培养瓶中,接种密度为3×105个细胞/cm2。(e)将细胞在37℃,5% CO2的条件下培养,每7天更换一次培养基,连续培养2〜4周。(f)去除培养基,用PBSA洗两次培养瓶(

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