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        杂交信号的放大

        相关实验:用非同位素探针进行原位杂交和检测实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1) 用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤,进行第一轮杂交信号检测。


        对生物素酰化探针信号的放大,可在基本方案步骤8之后的任何一步进行。


        2) 如果切片已加盖玻片并密封,可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油,移去盖玻片,并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于盛有 0.1% Triton ×-100/4×SSC的,以铝箔包裹的Coplin广口瓶15 min,轻轻摇动。如盖玻片不易松动,应小心抬起,重复洗涤2次。


        3) 吸去载玻片上残余溶液,在载玻片上加 50μL的1〜3μg/ml生物素酰化抗亲和素抗体,盖以22 mm2大小的Parafilm 膜,置加湿盒中,湿盒外裹以铝箔,放 37℃温育 30 min。


        4) 取掉Parafilm 膜,在 0.1% Triton ×-100/4 × SSC中轻摇洗涤15 min。


        5) 吸去玻片上残液,加50μL生物素信号放大溶液,盖以Parafilm膜。放在裹以铝箔的加湿盒中,于37℃温育30 min。


        6) 移去Parafilm 膜,并以 0.1% Triton×-100/4×SSC 洗涤 15 min。然后以 4×SSC洗涤15 min,洗涤时应轻轻摇动。可进行亲和素-荧光素和生物素酰化抗亲和素抗体的多层反应,但将会明显地增加本底。


        7) 复染,固定并在显微镜下观察

        来源:丁香实验

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