用梯度盐析的方法组装高浓度的单核小体实验

1. 准备如下的重组混合液（最后加入组蛋白）：

0.7 mg／ml DNA 片段

20 mmol／L Tr1s·Cl， pH 7.7 （1 mol／L 储液）

10 mmol／L DTT （1 mol／L 储液）

1 mmol／L EDTA， pH 8.0 （0.5 mol／L 储液）

2 mol／L KCl （2.5 mol／L 储液）

0.5 mmol／L 苄脒（0.5 mol／L 储液）

0.63 mg／ml 组蛋白。

混匀后，4℃ 组装 30 min。

2. 装好「兔子」泵装置，将流动速度设定为　205～210 ul／min （图 1）。

图1 梯度盐透析的组装［改自文献（Lugeretal，1999）］

3. 将反应混合液加入 6000～8000 MWCO 透析管中。

4. 将膜放入盛有高盐缓冲液的烧杯的中央，打开泵，4℃ 运行约 50 h。

5. 每隔 5 h 测定烧杯中溶液的导电性（约 300 mmol／L 50 h）。

6. 在无盐缓冲液中透析（＞3 h）。

7. 0.7％ 琼脂糖凝胶电泳或 5％ 聚丙烯酰胺 0.5×TBE 凝胶电泳检测组装的情况。

8. 在 10％～30％ 甘油梯度上从自由的 DNA 上纯化核小体，100 000 g·离心 18.5 h 左右。得到的片段可于4℃ 保存 2 个月。