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        辅助方案 TCA沉淀测定标记掺入量

        相关实验:氨基酸代谢标记实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 加 10~20 μl 被标记的细胞悬液到 0.1 ml 0.1%(m/V)BSA/0.02%(m/V)NaN3 中,置于冰上。


        2. 加 1 ml 冷冻的 10%(m/V)TCA 溶液。剧烈振荡混匀,在冰上孵育 30 min。


        3. 在真空滤过装置内,滤过细胞悬液到 2.5 cm 玻璃微纤维滤膜上。


        4. 用 5ml 冷冻 10%TCA 溶液洗膜 2 次,再用乙醇洗 2 次。空气干燥 30 min。


        5. 在玻璃微纤维滤膜上点同样体积(见步骤 1,10~20 μl)的放射性标记的细胞悬液,在空气中干燥。


        6. 转移滤膜到 20 ml 闪烁管里,加 5 ml 闪烁记数溶液,用闪烁记数仪测定放射活性。


        7. 计算 TCA 沉淀标记(见步骤 4)与总放射活性的比值(见步骤 5)。

        注意事项

        1. TCA 有强烈腐蚀性。在制备和操作 TCA 溶液时注意保护眼睛并避免皮肤接触。

        2. 洗液应按照混合化学/放射性废弃物处理。根据安全规程进行处理。

        来源:丁香实验

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