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        技术和方案26 小量提取E.coli DNA

        相关实验:酵母遗传学方法实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        试剂、试剂盒

        步骤

        1.将单菌落接种于 3 ml 含有 100 ug/ml 氨节青霉素的 Terrific broth 培养基中,37°C 培养过夜。

        2.取 1.5 ml 细胞悬液于微量离心管中,13000 r/min 离心 1min,弃去上清。

        3.加入 100 ul 溶液 1[50 mmol/L 葡萄糖/10 mmol/LEDTA/25 mmol/L Tris(pH8.0)],用移液器吸头搅松菌块,使管底一侧的细胞脱落下来,用旋涡振荡器完全悬浮细胞。

        4.加入 200ul 溶液 2(0.2mol/L NaOH/l%SDS),颠倒微量离心管 4 次混勻。冰浴 5 min。

        5.加入 150ul 溶液 3(3mol/L 钾盐/5mol/L 乙酸盐),上下轻摇管子 4 次混匀。冰浴 5 min。

        6.13000r/min 离心 5 min。

        7.将上清倒人一个装有 500ul 苯酚的离心管中,旋涡振荡器充分混合,13000r/mm 离心 5 min。

        8.取 300ul 上清移入一个洁净离心管,加入 750ul 100% 乙醇,振匀,室温放置 2 min。

        9.13000r/min 离心 5 min 沉淀 DNA。倒去上清,倒扣于纸巾上约 5 min 排干液体。

        10.以 50ul 溶液 4[TE (pH8.0)+10ug/ml RNase A] 悬浮 DNA 沉淀。

        来源:丁香实验

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