技术和方案13 已固定细胞的肌动蛋白染色

鬼笔环肽专一性地结合 F 肌动蛋白，荧光标记的鬼笔环肽染细胞与肌动蛋白抗体的染色模式类似。

1.在 500 ml 三角瓶中振荡培养 25 ml 酵母菌至密度为 2X107 个/ml。

2.添加 17 ml 10% 甲醛（EM 电子显微级）到培养基中至终浓度 4%，在酵母菌生长温度下固定细胞 10 min。

3.2000~3000r/min 离心 5 min，收集细胞。

4.在 6 ml 加了 4 ml 10% 甲醛（EM 级）的 PBS 溶液中室温固定细胞 lh。

5.用 10 ml PBS 洗细胞两次，重悬在 500ul PBS 中。

6.取 180ul 细胞悬液，添加 20ul 罗丹明鬼笔环肽或荧光素鬼笔环肽。避光温育 lh，每融 15 mm 轻轻混合。

7.用 1ml PBS 洗细胞 5 次。

8.悬浮细胞在约 200ul 免疫荧光固定液中。放置于 -20°C，染色细胞可以保存几个月。

9.观察细胞时，滴 1ul 细胞悬液在盖玻片下，通过毛细管作用细胞液能铺满玻片。确保玻片清洁。