基本方案1 PCR 扩增的 DM 三核苷酸重复的杂交分析

最新修订时间：2024-05-13

材料与仪器

试剂、试剂盒	溴化乙锭寡核苷酸预杂交杂交缓冲液 Lumi-Phos 530 底物溶液 10 X 凝胶载样缓冲液 PCR 引物 dNTP 混合物 10 X PCR 扩增缓冲液 Taq DNA 聚合酶琼脂糖凝胶 1 X TBE 缓冲液洗脱缓冲液矿物油
仪器、耗材	厚梳齿尼龙膜放射自显影胶片喷涂器 PCR 管铸造托盘循环温度仪

步骤

基本方案1 PCR 扩增的 DM 三核苷酸重复的杂交分析

支持方案 1 使用真空印迹设备进行 PCR 产物的快速转移

支持方案 2 DM 三核苷酸重复扩增的放射性检测

1. 膜在预杂交/杂交缓冲液中以50°C预杂交I.5h。 2. 在预杂交/杂交缓冲液中，以 lOng/m 丨柱纯化的 [7-32P ] d A T P 末端标记的 (C T G )1 。寡核苷酸与膜50°C 杂交2h。 3. 按照下列步骤洗脱杂交膜（放射性标记比酶学分析更经得起严格标准的考验）：洗脱缓冲液I --- 洗脱两次，每次5min， 5S° C ; 洗脱缓冲液II--- 洗脱两次，每次5min， 55°C ; 洗脱缓冲液ID--- 洗脱一次， 3〜5. min， 55°C 。 4. 室温，将膜与X -A R 自显影胶片曝光〇.5〜3h。