方案4 离线 micro-IMAC 富集磷酸化蛋白实验

相关实验：用蛋白质组学方法绘制磷酸化位点图谱

最新修订时间：2024-05-13

材料与仪器

实验材料	来自目标磷酸化蛋白的多肽
试剂、试剂盒	氯化铁 EDTA 乙酸铵
仪器、耗材	接口和组合件压力管聚酷亚胺涂层熔融石英毛细管氮压缩气体聚四氟乙烯管 IMAC树脂

步骤

一、IMAC 微柱的构建制备

方案4 离线 micro-IMAC 富集磷酸化蛋白实验

二、磷酸化多肽的富集

⑫ 在 200p si的压力下加O lp m o l) 蛋白消化产物（<5/il) 到 IMAC柱上，多肽混合物应该溶解在水或〇 .〇5mol/L 乙酸中。
⑬ 用 0. lmol/L 乙酸在200psi的压力下洗柱子2. 5m i n 。 ⑭ 在 200psi的压力下用水洗柱子2. 5m i n 。 ⑮ 在 200psi的压力下用50m m o l /L N a 2H P O 4 (p H 8 ) 和乙酸铵（0. 1 % ) 溶液从柱子上洗脱磷酸化多肽，用微量离心管收集洗脱下来的多肽，直接按照方案5 做 M S /M S 分析。 I M A C 介质的再生 I M A C 柱可以再生，方法如下： ① 在 500psi的压力下用水洗柱子2. 5min; ② 在 500psi的压力下用E D T A (0. lmol/L ) 洗柱子2. 5mi n; ③ 在 500psi的压力下用水洗柱子2. 5min; ④ 在 500psi的压力下用0. lmol/L 乙酸洗柱子2. 5min。柱子保存于〇.Imol/L 乙酸中，可以重复使用三次，然后丢弃。

来源：丁香实验

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