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        方案2 将蛋白质从凝胶电转移至 PVDF 膜实验

        相关实验:蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        要点:为了避免凝胶或膜的蛋白质污染,进行以下操作时需戴手套。

        1.凝胶电泳之后,立即将凝胶转移到一个塑料容器中。

        凝胶在电印迹之前不能进行染色,因为接触甲醇/乙酸会使蛋白质固定在聚丙烯酰胺凝胶上,会大大降低从凝胶电转移到膜上的蛋白量。

        2.加入足以浸没凝胶的转移缓冲液,在室温放置 5~lOmin。

        3.根据凝胶大小剪一块 PVDF 膜,用 100% 甲醇润湿后迅速转移到一个内有转移缓冲液的塑料容器中,在室温下浸泡膜 5 min。

        4.将凝胶和膜都从转移缓冲液中取出,按照仪器要求组装到电印迹装置里。

        5.凝胶在 4°C 条件下,500mA 电转移 3 h。注意参照仪器所要求的特殊条件。例如,对一些仪器的特殊要求如下:

        若使用 Mini Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell(Bio-Rad):90~100V 转移 Ih 或 30V 保持过夜。

        若使用 Trans-Blot Electrophoretic Transfer Cell(Bio-Rad): 转移时间依赖于凝胶浓度和膜的大小,可以从 30 min~4 h。在 4℃时,如使用 Gly-Tris 缓冲液,100V 对应的电流约 360mA,150V 对应的电流约 550mA,200V 对应的电流约 850mA。

        6.按方案 3 检测膜上的蛋白质。
        方案2 将蛋白质从凝胶电转移至 PVDF 膜实验
        方案2 将蛋白质从凝胶电转移至 PVDF 膜实验

        来源:丁香实验

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