肽类的电泳 (Tricine-SDS-PAGE) 实验

在定量分析蛋白质混合物方面，最广泛采用的蛋白质组学方法就是 SDS-PAGE。

因为它根据蛋白质的大小不同分离蛋白，所以对于检测蛋白纯度特别有用，同时也应用于蛋白质相对分子质量（Mr) 的测定。影响到 SDS-PAGE 蛋白分离效果的因素有：

①丙烯酰胺与交联剂（双丙烯酰胺）的比例；

②用于制备浓缩胶和分离胶的丙烯酰胺/双丙烯酰胺的比例；③浓缩胶和分离胶缓冲液 pH 及成分；

④样品制备的方法。

典型 Laemmli 胶系统（Laemmli，1970) 采用甘氨酸电泳缓冲液，能分离分子质量范围. 约 3000?200000Da 的蛋白。本方案中使用的是 ScMgger 和 vonJagow(1987) 的 tricine 凝胶系统，其中用 tricine[三（轻甲基）甲基甘氨酸] 代替了甘氨酸。这一系统可以分离小至 500Da 的肽类，适合 SDS-PAGE 肽图谱以及制备氨基末端、羧基末端测序的样品

1.按方案 1 制备不连续凝胶。

2.分别往电泳上槽和下槽中注入对应的电泳缓冲液。

3.按方案 1 的方法制备凝胶的蛋白质上样样品。

4.每块胶以恒流 25mA，从负极到正极开始电泳。

5.选用方案 2 或方案 7 中介绍的考马斯亮蓝或银染法使蛋白显现。