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        弗氏佐剂的使用方法实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        超声乳化弗氏完全佐剂(或弗氏不完全佐剂)

        水溶性抗原可经超声处理与弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂乳化。

        1.材料

        弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂

        无菌聚丙烯管

        防护眼镜

        注射器

        抗原(溶 于 PBS)

        超声探头

        乳胶手套

        冰浴

        盛有预冷自来水的烧杯

        2.步骤

        (1) 计算每次注射所需抗原量及体积。皮下注射或肌肉注射时,每 只 小 鼠 每 次 5〜100ug ,少 于 200uL。腹腔内注射时,每只小鼠每次 200 〜500uL。洗涤剂会减弱乳化作用,应避免。准备大约比所需量多 50 % 的疫苗。

        (2) 使 用 前 37℃预热弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂,强烈振荡 1〜2 min,或用手倒转瓶子数次将结核分枝杆菌均匀重悬。将弗氏完全佐剂与等体积的水溶性抗原转入一无菌聚丙烯管中。

        (3) 超声处理可产生大量热,会导致蛋白质抗原变性。为避免混合物过热,在超声中或间隙将聚丙烯管置于冰上。每 次 间 歇 5〜20s ,上下调节管的高度,确保整个混合物均匀乳化。注意操作时佩戴耳塞。

        (4) 倒转聚丙烯管以确定乳化剂的稠度。持续乳化,间隙 10s,直到稳定的乳化剂形成 。当乳化剂在倒转的管中不动或在水面上形成稳定的油珠时,乳化即可完成。

        (5) 将乳化剂吸人 1ml 注射器,或 者 用 Spack 和 Toaves 的 [18] 转移技术将乳化剂转人 1ml 注射器内,具体步骤如下:从一个注射器上取出无菌推芯,芯头的大小与乳化剂所在的管内直径一致。乙醇擦拭管底以灭菌,然 后 用 灭 菌 的 18 号针头在管底穿孔,握住一个已拔出推芯的 1ml 无菌注射器顶部直接对准乳化剂管底的洞,用上述大小合适的无菌推芯将管内乳化剂从管底推人 1ml 注射器。

        来源:丁香实验

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