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        用蔗糖密度梯度法纯化线粒体

        相关实验:线粒体分离实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 在用于 Bockman SW28 号转头(或与其等同的产品)的 Uitradear 离心管中,小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一层 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液,形成 30 ml 的梯度:

        1.0 mol/L 蔗糖和 1.5 mol/L 蔗糖溶液中含:

        10 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.5)

        1 mmol/L EDTA,pH 7.5

        2. 小心加入线粒体悬液(总体积 7 ml),60000 g(22000 r/min)离心 20 分钟。线粒体会在 1 mol/L 和 1.5 mol/L 界面处形成一薄层。

        3. 移去样品层及其与 1.0 mol/L 层的交界。

        4. 用一巴斯德吸管轻柔的在 1.5 mol/L 层顶部吸出线粒体。

        5. 稀释蔗糖溶液,17000 g 离心 15 分钟沉淀线粒体。

        6. 用 30 ml 缓冲液洗一次,重悬浮于合适体积的适于后续工作的缓冲液中。

        来源:丁香实验

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