• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        多聚类异戊二烯取代物的确证

        相关实验:甲基化和异戊烯化作用的检测实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. SDS-PAGE 和电洗脱分离目的蛋白。

        2. 洗脱的蛋白中加牛血清白蛋白载体使最终浓度为 0.1 mg/ml,并用 5 倍体积的含 1.5% 氢氧化氨的冰冷丙酮处理 30 分钟以沉淀蛋白。

        3. 离心收集沉淀蛋白,倒掉上清,在真空下干躁沉淀物。

        4. 在 0.4 ml 的乙醇:甲酸(4:1 ) 溶液中重悬蛋白,并转到一个带玻璃螺丝帽的试管中。

        多聚类异戊二烯取代物的确证

        5. 加 0.1 ml 的拉尼镍混合液(Aldrich),然后加 1 ml 水饱和戊烷。

        6. 用 Teflon 带绕细线封紧试管,并用 Teflon 线拧上一个帽。

        7. 在 100℃ 热块上加热试管过夜。

        8. 取出顶层保存在一个新试管中,然后再用 1 毫升戊烷再次抽提底层。

        9. 收集戊烷层于圆锥型样品瓶中,在盐水冰浴中蒸发到干燥。

        10. 用 100~200 μl 的己烷清洗试管的侧壁,将己烷溶液倒入一个干净的锥形样品瓶中,并且蒸发至较少的体积(10~20 μl)。

        11. 通过放射气相液体色谱法分析样品,使用 15 m、DB-5、中等极性的百万孔的柱子去分离并按照下列条件走柱:

        后始温度,100℃;启始时间,4 分钟;速率,每分钟 10°。最终温度,300℃;最终时间,1 分钟。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序