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        利用肽底物分析酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ

        相关实验:用肽底物检测蛋白质激酶的活性和特异性实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 在离心管里配制 50 μl 反应混合物:

        5X 酪氨酸激酶分析缓冲液                           10 μl

        10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液                5 μl

        [γ-32P] ATP(终浓度 5 μCi/5 μmol/L ATP)     5 μl

        水(取决于下一步所加的激酶样品的量)      0~30 μl

        5X 酪氨酸激酶Ⅰ和Ⅱ分析缓沖液

        100 mmol/L Tris-HCI,30℃ 时(pH 7.5)

        25 mmol/L MgCl2

        2.5 mmol/L DTT

        750 mmol/L KCl

        2. 加入 1~30 μl 激酶样品开始反应,继续于 30℃ 孵育一定时间。

        3. 停止反应,依照利用 β-酪蛋白作底物的分析反应产物。

        来源:丁香实验

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