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        衣藻的遗传技术(转化)

        相关实验:衣藻的遗传技术(转化)实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 500 ml 烧瓶中装 250 ml SGII 培养基,在通气和恒定光照条件下,培养细胞至 5X106 /ml 密度。

        2. 用 EcoRI 酶切质粒。

        3. 去细胞壁,低速离心浓缩细胞,在 SGII-NO3 培养基重悬细胞为 109 个/ml。

        4. 将细胞放入灭菌烧瓶中,刚好盖上瓶底,在亮光下轻摇 4 个小时。

        5. 转化时,将细胞稀释到 1.7X108 个/ml,取 0.3 ml 加入装有 0.3 g 玻璃珠的 15 ml 带塑料帽的圆锥形离心试管中。

        6. 加入灭菌 PEG 溶液,终浓度为 5%。

        7. 立即加入 1 μg 线性化的 pMN24 DNA,用旋转混合仪最高速度旋转混合 45 秒。

        8. 立即加入 10 ml SGII-NO3 培养基稀释交配混合液,将细胞倒入一干净的 15 ml 试管中,用桌面医用离心机沉淀离心。

        9. 留 0.3 ml 培养基,重悬细胞,涂布在 SGII-NO3 培养基的 1% 琼脂平板上。

        10. 平板放在恒定的光照下孵育 5~8 天。

        11. 通常转化后孵育 8 天,克隆可用肉眼观察到时,用灭菌牙签将单个克隆转到多孔皿上含少量 SGII-NO3 培养基的单个孔中过夜培养。

        12. 在选择培养基平板上划线,分离转化的纯克隆。

        来源:丁香实验

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