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        新鲜实体组织样本的制备(酶消化法)

        相关实验:新鲜实体组织样本的制备(酶消化法)

        最新修订时间:

        原理

        对实体组织分散的作用原理主要有3个方面:① 可以破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等;② 可以水解组织间的黏多糖等物质;③ 可以水解组织细胞间的紧密联结装置的蛋白质物质。

        材料与仪器

        实验材料
        仪器、耗材

        步骤

        1. 将适合于酶消化的组织置于离心管中。

        2. 将选好的酶溶掖 1~2 ml 加入盛有被消化组织的试管中。

        3. 一般消化 20~30 min ( 恒温 37℃ 或室温),消化期间要间断振荡或吹打。

        4. 终止消化,收集细胞悬液,以 300 日尼龙网过滤,除去细胞团块,以低速离心除去细胞部片。

        5. 将制备好的单细胞悬液进行荧光染色后上机检测,或保存备用。

        注意事项

        1. 酶需要溶解于适当的酶液中,而这些溶液不至于造成酶效价降低。

        2. 要注意酶的使用浓度和消化时间。

        3. 要注意酶活性的 pH 值,胃蛋白酶在碱性环境中会失去活性,而胰蛋白酶在中性溶剂中活性不佳。

        4. 要随时注意影响酶活性的其他因素,如酶的生产批号等。

        来源:丁香实验

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