pLAM12乙酰胺酶启动子质粒

11个注意事项帮你搞定细胞转染

后在培养基中加入PHA-L和PMA可以激活Jurkat细胞中CMV启动子，而单PMA就足以激活KG1和K562(人骨髓瘤白细胞)中的CMV启动子。SV40启动子的表达在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)时会提高，因为大T抗原可以刺激染色体外的合成。 06DNA量 高质量的DNA对于进行高效的转染至关重要。转染的质粒一定纯度好、浓度高、无内毒素。浓度不要低于0.35ug/ul。产物表达，48小时mRNA表达最高；72h蛋白表达最高。 07瞬时/稳定转染表达 稳定基因表达符合长期生产需求

病毒工具常见问题

后 4 小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察，若发现细胞状态变差，则需要立刻对细胞进行换液操作，使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液 感染增强剂浓度过高，具有毒性作用 降低感染增强剂浓度，并考虑减少暴露时间 转染的基因对细胞有毒性 改进基因设计，使用不同的启动子或条件诱导型表达系统，避免毒性基因的持续过表达 细胞状态不佳或培养条件不适 确保细胞健康，优化细胞生长状态，选择对慢病毒耐受性好的细胞系   7、病毒感染后 qPCR 检测无过表达效果，可能

做原核表达的几点教训和体会

B－内酰胺酶就会积累到很高的浓度。转接时（我是1:50转的），高浓度的酶可能破坏新鲜培养基中的Amp（而且我用的浓度是50 ug/ml）。这样，就造成最后收集的菌中，大部分都是没有带质粒的菌了。 当然还有一个可能的原因就是死亡的菌体分泌一些降解酶，使得表达检测失败。 这两种推测都只是推测，但我觉得第一种情况应该引起我们的重视。在使用Amp抗性的时候要格外注意。 4.  第三次做诱导就格外小心了。首先，晚上12点我才接菌，到第二天早上就开始转接