材料与仪器
步骤
操作程序
1) 以合适的缓冲液为空白对照，小心测定蛋白质溶液自 210nm 至 340nm 的紫外光谱。
2) 如 310mn 至 340nm 未见吸收（蛋白质在这一区域没有吸收），可简单地测定 280nm 和 260nm 处的吸收值，A280nm/A260nm 比应为 1.8~2.0。
3) 如 310nm 至 340nm 可见明显吸收，则是光散射所致（是由于蛋白质大或是聚集作用的结果)，必须用 Leach 和 Sheraga(1960) 法校正 A280nm 和 A260nm 值。此法是以吸收值的对数对波长的对数作图，从 310mn 至 340rnn 的吸收值外推, 确定 280nm 和 260nm 处因光散射而造成的吸收值。经校正的 280nm 和 260nm 处的吸收值可用来确定 A280nm/A260nm 比, 并从 E(1 mg/ml) 得出蛋白质的浓度（见 P.168)。
1) 以合适的缓冲液为空白对照，小心测定蛋白质溶液自 210nm 至 340nm 的紫外光谱。
2) 如 310mn 至 340nm 未见吸收（蛋白质在这一区域没有吸收），可简单地测定 280nm 和 260nm 处的吸收值，A280nm/A260nm 比应为 1.8~2.0。
3) 如 310nm 至 340nm 可见明显吸收，则是光散射所致（是由于蛋白质大或是聚集作用的结果)，必须用 Leach 和 Sheraga(1960) 法校正 A280nm 和 A260nm 值。此法是以吸收值的对数对波长的对数作图，从 310mn 至 340rnn 的吸收值外推, 确定 280nm 和 260nm 处因光散射而造成的吸收值。经校正的 280nm 和 260nm 处的吸收值可用来确定 A280nm/A260nm 比, 并从 E(1 mg/ml) 得出蛋白质的浓度（见 P.168)。
来源：丁香实验
