无去垢剂的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

材料与设备

丙烯酰胺

双丙烯酰胺

Tris 碱

蔗糖

HCl(1mol/L)

过硫酸按（0.3 g/ml)

N,N,N'，N'-四甲基乙二胺 (TEMED)

平板凝胶电泳装置

电源（250V)

考马斯亮蓝染料

试剂

上槽缓冲液

下槽缓冲液

样品缓冲液（5x)

(配方，见「试剂的配制」，PP.82~83)

操作程序

1) 将下列成分溶解于 H₂0 中并调节体积至 47.9 ml

丙烯酰胺                                                     6.0 g

双丙烯酰胺                                                 0.144 g

Tris 碱                                                         2.18 g

蔗糖                                                            4.80 g

HCl( 1mol/L)                                                2.88 ml

2) 溶液置于具侧管的烧瓶中真空脱气。

3) 加 100ul 0.3 g/ml 过硫酸铵，缓缓旋动使之旋入溶液中。

4) 加 5ul TEMED, 迅速混匀后，将凝胶溶液注入玻板之间。

5) 轻轻叩击玻板，释出所有气泡，插入梳子，用水覆盖凝胶至凝结。

6) 将凝胶置于电泳装置中。将上槽缓冲液和下槽缓冲液倒入相应的槽中。

7) 将样品以 4:1 与 5X 样品缓冲液 (如,80ul 样品+20ul 5x 样品缓冲液) 混合。

8) 小心地拔出梳子，加样于凝胶孔中，200V 恒压下电泳。

9) 按 Laemmli 凝胶那样，用考马斯亮蓝染色（见附录 5)。