外泌体荧光染料（DiR）

产品名称：外泌体荧光染料（DIR）

产品用途：适用于活体成像和示踪

保存方式：-20℃ 避光；

运输条件：低温；

产品介绍：

DiR是一种亲脂性的近红外荧光花青染料。其两个18-碳链可以与细胞膜或亲脂性生物分子结合，从而进行特定、稳定的染色。DiR所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，所以常用于活体成像和示踪。

产品参数：

分子式：C63H101IN2

分子量：1013.4

溶剂：DMSO

λEx/λEm(MeOH) = 748/780 nm

产品优势：

专注于外泌体提取和配套试剂盒研发；

性价比高，为您的研究开展节省成本；

三百篇参考文献让您放心使用无忧购；

使用说明：

一、 染料工作液制备

将“外泌体荧光标记染料（DiR）”用1×PBS稀释10倍，配制成浓度为100 μM的染料工作液。

二、 外泌体染色

1、 在外泌体悬液中加入染料工作液，建议染料终浓度为10~20 μM（按照终体积的1/5~1/10加入100 μM的染料工作液）；

2、 加入染料工作液后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再放置于37℃孵育30 min；

3、 向孵育后的外泌体-染料复合物中加入10 mL的1×PBS混匀；

4、 按照外泌体提取方法再次提取外泌体以去除游离染料；

5、 取200 μL 1×PBS重悬沉淀物，即为染色后的外泌体。

注意事项：

1、 荧光染料均存在淬灭问题，请注意避光，以减缓荧光淬灭；

2、 染料工作液应现配现用，不能提前配制，否则将影响染色效果；

3、 DiR 染色固定细胞或组织样品时，样品宜使用 4% 多聚.甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高；

4、 本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其它用途！

常见问题：

1、 活体成像对外泌体浓度要求较高，建议用于染料标记的外泌体原始浓度达到 0.5~1.5 μg/μL，外泌体浓度过低实验失败风险较高。

2、 外泌体染色步骤中去除游离染料的第 3、4 步必不可少，以避免游离染料对后期实验的干扰。这一步相当于重新提取外泌体，所有外泌体提取纯化方式都适用。

3、 去除游离染料的方法推荐选择 3~10 KD 的超滤管，利用其置换溶剂功能去除游离染料。具体步骤和实验参数请咨询超滤管厂商。

4、 DiR碘化物（DiR染料）的发射波长肉眼不可见，需要使用配备CCD镜头或其他设备的近红外检测仪器，建议使用活体成像仪。

5、 建议染料标记的外泌体在注射后 24 h内设置梯度时间进行观测，多数情况下，在注射后2~8 h荧光强度达到峰值。为保证观察结果，小动物需要做剃毛处理。

6、 由于以下两个原因，建议制备 2 倍于活体成像或示踪实验所需外泌体量以进行染料标记：1)外泌体染色效率难以达到100%；2)在去游离染料过程中无法避免外泌体的损失。

参考文献：

[1] Extracellular vesicle in vivo biodistribution is determined by cell source, route of administration and targeting. PMID: 25899407

[2] Efficient exosome delivery in refractory tissues assisted by ultrasound-targeted microbubble destruction. PMID: 30744440

[3] Intravenously delivered mesenchymal stem cell-derived exosomes target M2-type macrophages in the injured spinal cord. PMID: 29293592