方案27.2 用 PHA 刺激淋巴细胞

1. 取在方案 27.1 中步骤 7 清洗的细胞，用 HEPES 或 CO₂ 缓冲的 DMEM、CMRL 1066 或添加 10 % 自体血清或 FBS 的 RPMI 1640 培养，细胞密度为 2×10⁶ 个/ml，培养深度为 1.5~2.0 cm。

2. 按 5 μg/ml 终浓度加入 PHA，刺激有丝分裂 24~72 h。

3. 分别在 24、36、48、60 和 72 h 收集细胞，制备涂片或离心制备细胞玻片，以确定最佳培养时间（即最大分裂指数）。

4. 按 0.001 μg/ml 终浓度加人秋水仙酰胺（用 BSS 配制），处理 2 h。有丝分裂高峰的出现比在步骤 3 所观察到的提前 [ Berger, 1979 ]。

5. 在秋水仙酰胺处理后，将细胞离心。然后，用 0.075 mol/L KCl 混悬细胞，使细胞低渗肿胀，制备染色体（见方案 16. 7 和方案 27. 5)。