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        比色法检测血清碱性磷酸酶(ALI)实验

        相关实验:比色法检测血清碱性磷酸酶(ALI)实验

        最新修订时间:

        原理

        在PH10的反应液中,碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠水解,生成游离酚和磷酸,酚在碱性溶液中与4-氨基安替比邻结合,并经铁氯化钾氧化生成显红色的醌的衍生物,根据红色深浅计算酶活力的高低。

        材料与仪器

        步骤

        一、 实验试剂:

        l. 0.1mol/L碳酸盐缓冲液(PH10.0)

        溶解无水碳酸钠6.39g碳酸氢钠3.36,4-氨基安替比林结合1.5g于800ml蒸馏水中,将此溶液入1000ml容量瓶内,加蒸馏水至刻度,置棕色瓶中保存。

        2. 20mmol/L 磷酸苯二钠溶液:先将500ml蒸馏水煮沸,消灭微生物,逐渐加入磷酸苯二钠2.18g(如含2分子结晶水则应称取2.54g)冷却后加氯仿2ml防腐,置冰箱保存,称底物溶液.

        3. 铁氰化钾溶液:分别称铁氰化钾2.5g,硼酸17g各自溶于400 ml蒸馏水中待两液混合后,加蒸馏水至1000ml,置棕色瓶中避光保存,如出现蓝绿色即弃去。

        4. 酚标准贮存液(1mg/ml)简易购买商品标准液

        5. 酚标准应用液0.05mg/ml:酚标准贮存液5m1,加蒸馏水至100ml,此夜只能保存2-3天。

        二、 实验操作:取16mm×100mm试管按表进行编号与测定

        血清碱性磷酸酶测定步骤:
        比色法检测血清碱性磷酸酶(ALI)实验
        立即混匀,在波长51Onm,以蒸馏水调零点,读取各管吸光度.测定管吸光度,减去对照管吸光度,查标准曲线表,求出酶的活力单位。

        金氏单位定义:100ml,血清在37℃,与底物作用5分钟,产生1mg酚为一个金氏单位

        标准曲线绘制:

        比色法检测血清碱性磷酸酶(ALI)实验

        立即混匀,在波长510nm,以零号管调零,读取各管吸光度,并和相应酶活力单位绘制标准曲线。

        参考值:成年人:3 - 13 金氏单位

        儿童:  5 - 28 金氏单位

        注意事项

        1. 铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳定显色作用。

        2. 底物中不应含有游离酚,如空白管显红色,说明磷酸苯二钠开始分解应弃去不用。

        3. 加人铁氰化钾后必须迅速混匀,否则显色不充分。

        4. 黄疸血清及浴血血清分别作对照者,一般血清标准本可以共用对照管。

        来源:丁香实验

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