糖化血清蛋白测定实验

血清葡萄糖能与白蛋白及其它血清蛋白分子N末端的氨基上发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构．此酮胺结构能在碱性溶液中与硝基四氮唑蓝（NBT）发生还原反应，生成用甲胺，并以1－脱氧―1―吗啉果糖（OMF）为标准参照物进行比色测定，本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

一、实验试剂：

1、0.1mmol/L碳酸盐缓冲液，PH10.8：无水碳酸钠9.54g，碳酸氢钠0.84g，    溶于蒸馏水并稀释至1000ml。

2、0.11mol/L  NBT试剂：称取氯化硝基氮唑蓝100mg，用于上述缓冲液溶解并稀释至1000mL．置冰箱保存，至少可稳定3个月；

3、4mmol/L DMF标准液：称取DMF99.6g，熔于40g/L牛血清白蛋白溶液100ml中．

二、实验操作：

测定管加待检血清（血浆）0.1ml，空白管加蒸馏水0.1ml，各加37℃预温的NBT试剂4ml，混匀，置37℃水浴准确15min，立即取出，流水冷却（低于25℃），冷却后15分钟内分光光度计波长550nm，10nm光径比色杯以空白管调零，读取测定管．从标准曲线查得结果，以果糖胺mmol/L报告。

标准曲线制备：

取4mmol/L  DMF标准液用牛血清蛋白溶液（40g/L）稀释成1、2、3、4mmol／L，并以血清蛋白，40g/L与测定管同样操作，读取各浓度DMF相应的吸光度，以DMF浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制成标准曲线。浓度在4mmol/L以内与吸光度呈线性关系．

参考值：1.9十0.25mmol/L

1、PH值、反应温度，反应时间对本实验影响较大，必须严格控制．

2、血清蛋白经非酶促糖化反应可形成酮胺结构。DMF在适当的PH值及温度条件下，经过结构重排可由氧环式结构形成1－脱氧－氨基－2－酮基的酮胺结构，因此用它作为标准参照物是合理的．以mmol/L报告结果较为理想．

3、固定值冻于精化血红蛋白做标准，测定结果更稳定，因为不同的标准物时所测得结果不完全一致，最好建立实验室的参考值。