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        血清粘蛋白测定实验

        相关实验:血清粘蛋白测定实验

        最新修订时间:

        原理

        0.6 mol/L 过氯酸测定血清中蛋白质时粘蛋白不被沉淀,而存留于滤液中,再加磷钨酸使粘蛋白沉淀,然后以酚试剂测定其中蛋白质的含量。

        材料与仪器

        步骤

        一、实验试剂:

        1. 154mmol/L氯化钠溶液.

        2. 1.8mol/L过氯酸:取含水量为70%-72%过氯酸28ml,加蒸馏水稀释200ml并标定之.

        3. 17.74mmol/L磷钨酸溶液,称取磷钨酸5g溶于2mol/L盐酸中并加至100ml。

        4. 酚试剂:于1500ml球形烧瓶中加钨酸钠100g,铝酸钠(Na2MoO4·2H20)25g,水700ml,浓磷酸50ml,浓盐酸100ml:缓缓用细流蒸馏10h。取下冷凝管,加硫酸锂75g,蒸馏水50ml,并加溴水2-3滴,再煮沸15min,以除去多余的溴,冷却后稀释至1000ml,制成的酚试剂为鲜明黄色,置棕色瓶保存,用前取出一部分,以等量蒸馏水稀释之。

        5. 1.88mol/L碳酸钠溶液。

        6. 标准酪氨酸溶液(1ml=0.05mg);精确称取酪AA5mg,以0.lmol/L盐酸溶液并稀释至100ml。

        二、实验操作:

        血清0.5ml,加154mmo/L氯化钠4.5ml,混匀,1.8mol/L,过氯酸溶液2.5ml,静止10min,用定量滤纸过滤或离心.取溶液2.5ml,加17.74mmol/L磷钨酸0.5ml混匀,静止10min,以3000r/min离心10min,倾去上清液沥干,再加磷钨酸溶液2ml,悬浮沉淀物,同法离心后倾去上清液.取沉淀备用。

        按下表测定
        血清粘蛋白测定实验

        混匀,放置37℃水浴15min,取出比色,用分光光度计650nm,比色杯光径1.0cm,以空白管调零,读取各管吸光度。

        三、计算:

        血清粘蛋白(g/L)=测定管吸光度/标准管吸光度×1.785血清粘蛋白(mg/L)(以酪氨酸计)测定吸光度/标准管吸光度×75

        参考值:以蛋白计为0.71-0.87g/L

        以酪氨酸计为33.8土27mg/L

        注意事项

        1、本法影响因素很多。正常值观察报告不一,故无论用蛋白或酪AA表示结果,均须说明所采用的方法及正常值。

        2、操作中血清与154mmol/L氯化钠液稀释液必须准确。

        3、滴加过氯酸的速度宜慢。以30-40s时间内加完2.5ml为宜,速度过快易发生混浊,离心后不易得到清晰的上清液。

        4、过氯酸沉淀血清蛋白在30℃以下进行较好,否则结果编低。

        5、过氯酸为强氧化剂,应按危险品条例保存。

        来源:丁香实验

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