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        植物体内多酚氧化酶活性的测定实验

        相关实验:植物体内多酚氧化酶活性的测定实验

        最新修订时间:

        原理

        多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,在有氧的条件下,能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度,即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下:.

        植物体内多酚氧化酶活性的测定实验

        材料与仪器

        步骤

        1. 粗酶液的制备

        称取马铃薯块茎5g于研钵中,加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(事先用蒸馏水浸洗,然后过滤以除去杂质)和100 ml 0.1mol·L-1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆,用几层纱布袋过滤,滤液加入30%饱和度硫酸铵,离心除沉淀,上清液再加硫酸铵使达60%饱和度,离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2~3 ml 0.01mol·L-1 pH6.5磷酸缓冲液中,即为粗制酶液。

        2. 活性酶的测定

        在试管中加入3.9 ml 0.05 mol·L-1 pH5.5磷酸缓冲液,1.0 ml 0.1 mol·L-1儿茶酚在37℃恒温水浴中保温10min ,然后加入0.5 ml酶液(可视酶活性增减用量),迅速摇匀,倒入比色杯内,于525nm波长处以时间扫描方式,在1~2min内测定吸光度变化(A)值。

        常见问题

        酶活性的计算:
        植物体内多酚氧化酶活性的测定实验

        来源:丁香实验

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