植物根系伤流液中氨基酸总量的测定实验

氨基酸与水合茚三酮作用后，能产生二酮茚－二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，其颜色的深浅与氨基酸的含量成比例。测定反应产物在520nm波长处的吸光度值 ，即可计算出样品中氨基酸的含量。

一、材料仪器设备及试剂

1.材料：根系伤流液。

2.仪器设备：分光光度计，加热设备，试管，试管架，移液管，洗耳球。

3.试剂及配制：95﹪乙醇。

50μg· ml－1谷基酸氮标准母液：准确称取谷氨酸52.52 mg ，溶于100 ml 10﹪异丙醇溶液中。

3﹪水合茚三酮：称取水合茚三酮3g, 溶于100 ml 95﹪乙醇中。

二、实验步骤

1. 谷氨酸氮标准曲线制作

（1）取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～25μg的谷氨酸氮标准液。

加入表中试剂后，摇匀，置于沸水浴中准确加热10min，溶液变为蓝色，表示有氨基酸存在，取出后各管立即加入5 ml 95％乙醇，摇匀，冷却后以0号管溶液作空白对照，于520nm波长下测定吸光度（A）值。

（2）标准曲线绘制

以1～5号管谷氨酸氮含量为横坐标，吸光度（A）值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 伤流液中氨基酸含量的测定

取3支试管（三个重复），编号，各加入伤流液0.5 ml，蒸馏水1 ml，3﹪水合茚三酮溶液0.5 ml，摇匀，置于沸水浴中准确加热10min后，取出各管立即加入5 ml 95％乙醇，摇匀，冷却后以标准曲线0号管溶液作空白对照，于520nm波长下测定吸光度（A）值。

三、结果计算

根据样品管的吸光度值，从标准曲线上查出相应的谷氨酸氮含量，三个重复求平均值代入下列公式计算伤流液中氨基酸含量。