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        Giemsa染色法

        相关实验:培养细胞的染色实验

        最新修订时间:

        原理

        Giemsa 染色是最常用的方法之一,它简便、快速,适用于多种细胞和染色体染色。

        材料与仪器

        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  染液制备

        (1)称Giemse粉0.5 g、甘油22 ml,在研钵内先用少量甘油与Giemsa充分混合,研磨至无颗粒;

        (2)再将剩余甘油混在一起;56 ℃保温2 小时后,加入33 ml纯甲醇,保存于棕色瓶内。

        2.  染色步骤(以盖片培养法或涂片法为例)

        (1)用pH6.8~7.38的Sorensen缓冲液,按1:9 比例取Giemsa染液和Sorensen缓冲液混合配成染色液;

        (2)细胞标本用甲醇固定10 分钟,或1:3醋酸/甲醇固定30 分钟,用滴管把染色液布满玻片上(注意不要有气泡,用染色缸染色亦可);

        (3)染10~15 分钟后,用自来水冲去玻片上多余的染料,空气干燥、二甲苯透明、光学树脂胶封固。

        3.  结果

        胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色。

        注意事项

        1.  染色液宜现用现配,保存时间最好不超过48 小时,旧染液染色效果不好。

        2.  Giemsa 对pH 极敏感,缓冲液pH 值要调准确,否则染色效果不好。

        3.  用染色
        缸染色时,随染色时间的延长,在染液表面常形成一层氧化膜(发亮),这层氧化膜易附在片上形成污秽,且不易除掉。因此在用染色缸染色,尤其用的不是现配者时,染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。

        4.  染色完毕,应把标本浸入水中洗除染液,
        或用自来水直接冲掉多余染液。

        来源:丁香实验

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