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        机械分散法

        相关实验:组织的分离实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        一、切割分离法

        在进行组织块培养时,可采用剪切法,一般多剪切成1 mm3
        小的块。

        具体操作如下:

        1.  无菌切取1 cm3组织一块,置入青霉素瓶或小烧杯中,左手斜
        持容器,右手持眼科尖剪或弯剪(剪柄较长为好)伸入容器中,反复剪切组织至1 mm3大小为止(成糊状)。

        2.  用吸管吸取Hanks液把附着在剪刀上的组织小块冲下,并再
        补加3~5 毫升Hanks液后,用吸管反复轻轻吸吹冲打片刻,低速离心、去上清、余下组织块即可用于培养。

        3.  剪刀剪切法可能对组织有一定损伤,但操作比较方便。

        可用手术刀反复切割法,把组织块放在凹窝玻璃中,两手各持尖手术刀一把,交错反复切害割至1 mm3为止。手术刀切割法对组织损伤较小,但在空气中暴露时间较长,污染机会大些。

        以上两方法都适用于组织块培养法。

        二、机械分散法

        某些软组织如脑、胚胎以及一些肿瘤组织等,可采用机械法进
        行分散。

        常用者有两种,一是把组织放入注射器针管中压挤法,二是把组织置于不锈钢
        纱网中用钝物压取法。

        不论用那一种方法,都应把组织块先剪成小块后再处理。

        其中以压取法较多用,其程序如下:
         
        1.  清洗

        取得组织后,先用BSS洗去表面血污,然后预切成5~10 mm3的小块,
        置入不锈钢网筛中(1 mm 孔径);

        2.  压挤

        把网筛放在大碟皿上方,一手持网筛柄,另手用无菌度管末端径轻压
        挤组织,使之穿过纱网,然后用吸管吸取营养液把纱网上剩余组织吹洗掉;

        3.  反复

        用吸管从碟皿中吸出较大组织块,置入10 μm 筛中,进行再压挤,方
        法同2;

        4.  镜检

        被滤过的悬液即可用于培养;可先吸取不许悬液镜检,如组织块过大,
        可再用20 μm 筛做进一步压挤,以分散成单个细胞或细胞团;

        5.  培养

        计数细胞后,接种培养。

        注意事项

        1.  机械纱网压挤滤过法简便易行,节省时间,但对组织可能有一定损伤。

        2.  纱网
        网眼愈小,所需压力越大,组织受损越重,故本法仅适用于处理软组织,对较硬组织和纤维性组织效果不好。

        来源:丁香实验

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