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        胶原酶消化分离法

        相关实验:组织的分离实验

        最新修订时间:

        原理

        胶原酶是一种由细菌中提取出的酶,对胶原有很强的消化作用,适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等。

        上皮细胞本身对胶
        原酶有一定耐性,但胶原酶对细胞间质有好的消化作用,可使上皮细胞与胶原成分脱离而不受伤害,效果甚好。

        此酶在钙和镁离子存在情况下仍有活性,故可用BSS和含有血
        清的培养液配制。

        材料与仪器

        实验材料
        仪器、耗材

        步骤

        1.  把漂洗干净的组织剪切成1—5 mm3 块,向每一培养瓶中置入若干块;

        2.  向每瓶中加入4.5 ml培养液,再注入5 ml粗胶原酶,使最终浓度为200 U/ml,pH6.5;

        3.  置36.5 ℃中4~48 小时;如消化缓慢可延长到3~5 天,期间无需摇动;可换液1 次(仍含有胶原酶);

        4.  检查消化效应可用轻轻摇动培养瓶的方法

        如见组织块已变软,散于瓶
        底,振荡后即散成细胞团和单个细胞,此时可轻轻倒出培养液,瓶内可能有很多巨噬细胞已附于瓶底,借此能把巨噬细胞从其它细胞中分开,可用于单独培养或不用弃之;

        5.  低速离心培养液5 分钟后,去上清,重悬于BSS中,再低速离心5 分钟,去上清;

        6.  加入新培养液制备成细胞悬液,可接种进行培养;胰蛋白酶和胶原酶消化时间与浓度上的差异,依消化温度而异,另外两种酶也可协同应用,浓度为:胰蛋白酶0.1 mg+胶原酶0.25 mg/ml。

        胶原酶消化分离法
        胶原酶消化分离法

        经过胶原酶消化后的上皮组织,由于上皮细胞对酶有耐受性,可能有一些上皮细胞团尚未被完全消化开。成小团的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生长,因此不必要再做进一步消化处理。胶原酶与胰蛋白酶并用时,尚可外加透明质酸酶。透明质酸酶对细胞表面糖基有作用。胶原酶与胰蛋白酶两者结合使用,对分散大鼠和兔肝等组织非常有效。

         

        来源:丁香实验

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