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        单克隆抗体亲和层析柱纯化重组人α2a干扰素(rHuIFN-α2a)

        相关实验:免疫球蛋白纯化技术

        最新修订时间:

        原理

        重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的细胞因子新型药物,已在国内外广泛投入临床应用,并取得了显著的疗效。国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高,美国NIH规定必须在90 %以上,因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。我们研制了rHuIFN-α2a的McAb 3F1,与CNBr活化的Sepharose 4B交联制成亲和层析柱,经1年60余次较大规模试用表明具有较理想的亲和层析纯化rHuIFN-α2a的性能,达到了国内外同类McAb的水平。由于McAb 3F1也能和rHuIFN-α2b结合,故极有可能亦适用于rHuIFN-α2b的亲和层析纯化。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  rHuIFN-α2a的粗提

        表达rHuIFN-α2a的工程菌用盐酸胍裂解,过DEAE凝胶柱粗提,收集活性峰。

        2.  亲和层析

        rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2,0.15 mol/L PBS透析过夜,上样于经pH7.2,0.15 mol/L PBS平衡的亲和层析柱,流速0.5 ml/分,然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02,再用pH2.4,0.1 mol/L甘氨酸-HC1洗脱,洗脱液立即转至pH7.2,0.15 mol/LPBS中透析过夜,测定蛋白浓度、纯度和活性。

        注意事项

        一、保存方法

        1. 亲和柱的再生

        先后用10个柱床体积、含0.5 mol/L NaCl的pH8.5,0.1 mol/L Tris-HCl和pH4.5,0.1 mol/L醋酸钠缓冲液流洗亲和柱,再用pH7.2,0.15 mol/L PBS充分平衡。

         
        2. 贮存

        加入1 /万的叠氮钠防腐,贮存于4 ℃冰箱。

        来源:丁香实验

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