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        线粒体膜势能的检测

        最新修订时间:

        原理

        线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用,多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡,而线粒体跨膜电位的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA 断裂)出现之前,一旦线粒体DYmt 崩溃,则细胞凋亡不可逆转。
         
        线粒体跨膜电位的存在,使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6 ( 3 ) ] 、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1] 、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM)等可结合到线粒体基质,其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。
         

        材料与仪器

        步骤

        将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123(1 mM)或终浓度为DiOC6(25 nM),JC-1(1 mM),TMRM(100 nM),37 °C 平衡30 min,流式细胞计检测细胞的荧光强度。
         

        来源:丁香实验

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