原理
乙酰胆碱在血液中被胆碱酯酶水解，产生醋酸和胆碱。在一定条件下，水解乙酰胆碱的量与胆碱酯酶的活性成正比。故在反应体系中，加入定量的乙酰胆碱使之参加反应，通过测定剩余的乙酰胆碱量即可计算出水解的乙酰胆碱量，从而推算出胆碱酯酶的活性。
乙酰胆碱的呈色反应：乙酰胆碱可与羟胺作用生成乙酰羟肟酸，后者在酸性条件下与三价铁离子形成褐色的羟肟酸铁络合物，其颜色的深浅可反映乙酰胆碱含量的多少。反应过程如下：
盐酸羟胺与氢氧化钠作用释放出游离羟胺
NH2OH·HCl＋NaOH NH2OH＋NaCl＋H2O
剩余乙酰胆碱与游离羟胺作用，生成羟肟酸化合物。
（CH3）3≡N－（CH2）2OCOCH3＋NH2OH CH3CONHOH＋ （CH3）3≡N－（CH2）2OH
羟肟酸化合物在酸性环境中与三氯化铁生成褐色的复合物（羟肟酸铁络合物）。
PH1～1.5
FeCl3＋CH3CONHOH （CH3CONHO）3 Fe＋HCl
乙酰胆碱的呈色反应：乙酰胆碱可与羟胺作用生成乙酰羟肟酸，后者在酸性条件下与三价铁离子形成褐色的羟肟酸铁络合物，其颜色的深浅可反映乙酰胆碱含量的多少。反应过程如下：
盐酸羟胺与氢氧化钠作用释放出游离羟胺
NH2OH·HCl＋NaOH NH2OH＋NaCl＋H2O
剩余乙酰胆碱与游离羟胺作用，生成羟肟酸化合物。
（CH3）3≡N－（CH2）2OCOCH3＋NH2OH CH3CONHOH＋ （CH3）3≡N－（CH2）2OH
羟肟酸化合物在酸性环境中与三氯化铁生成褐色的复合物（羟肟酸铁络合物）。
PH1～1.5
FeCl3＋CH3CONHOH （CH3CONHO）3 Fe＋HCl
材料与仪器
步骤
1. 取中试管加磷酸缓冲液0.85 ml，血样0.15 ml，置37±1 ℃的水浴中预热3～5分钟。
2. 加入7x10-3 mol/L Ach 溶液1.0 ml，GF 37±1 ℃的水浴中反应40 分钟（若反应不充分，可继续反应20分钟）。每隔10分钟振摇一次。
反应40分钟后立即加入碱性羟胺（1 mol/L NH2OH·HCl与3.5 N NaOH溶液在用前20分钟等容混合，并不时振荡）4.0 ml。
依次加入4 N HCl和3.7x10-1mol/L FeCl3各2 ml，每加一种试剂都要充分振荡。
上述反应液用滤纸过滤，将滤液倒入1.0 ml 的比色杯中，以530 nm的波长比色。
对照管
对照管1：为无血无Ach的其他试剂空白对照。
对照管2：为全血及试剂的空白对照，无Ach。
对照管3：（标准Ach值）：为反应系中全量Ach 的对照。
对照管的操作步骤与样品管相同。
表9-1 胆碱酯酶活性的测定步骤
计算：全血胆碱酯酶活性值以0.15 ml 全血在40 分钟内水解Ach 的uM数来表示（uM Ach/0.15 ml/40分钟）
酶活性值的计算：
全血胆碱酯酶活性值＝A3＋（A2－A1）－AS/A3－A1x7
A1，A2，A3和AS分别为对照管1，2，3和样品管的光密度值。A3－A1为单纯Ach全量的光密度值，A2－A1 为血液的光密度值，A3＋（A2－A1）为Ach. 血液和试剂的光密度值，A3＋（A2－A1）－AS 为分解的Ach的光密度值。
酶活性值的百分数计算：
样本全血胆碱酯酶活性值/正常全血胆碱酯酶活性值x100%。
2. 加入7x10-3 mol/L Ach 溶液1.0 ml，GF 37±1 ℃的水浴中反应40 分钟（若反应不充分，可继续反应20分钟）。每隔10分钟振摇一次。
反应40分钟后立即加入碱性羟胺（1 mol/L NH2OH·HCl与3.5 N NaOH溶液在用前20分钟等容混合，并不时振荡）4.0 ml。
依次加入4 N HCl和3.7x10-1mol/L FeCl3各2 ml，每加一种试剂都要充分振荡。
上述反应液用滤纸过滤，将滤液倒入1.0 ml 的比色杯中，以530 nm的波长比色。
对照管
对照管1：为无血无Ach的其他试剂空白对照。
对照管2：为全血及试剂的空白对照，无Ach。
对照管3：（标准Ach值）：为反应系中全量Ach 的对照。
对照管的操作步骤与样品管相同。
表9-1 胆碱酯酶活性的测定步骤
计算：全血胆碱酯酶活性值以0.15 ml 全血在40 分钟内水解Ach 的uM数来表示（uM Ach/0.15 ml/40分钟）
酶活性值的计算：
全血胆碱酯酶活性值＝A3＋（A2－A1）－AS/A3－A1x7
A1，A2，A3和AS分别为对照管1，2，3和样品管的光密度值。A3－A1为单纯Ach全量的光密度值，A2－A1 为血液的光密度值，A3＋（A2－A1）为Ach. 血液和试剂的光密度值，A3＋（A2－A1）－AS 为分解的Ach的光密度值。
酶活性值的百分数计算：
样本全血胆碱酯酶活性值/正常全血胆碱酯酶活性值x100%。
来源：丁香实验
