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        生物素酰化信号

        相关实验:杂交信号的放大实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤,进行第一轮杂交信号检测。
         
        2.  如切片已承加盖玻片并密封。可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油,移去盖玻片, 并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于0.1%Triton X-100/4×SSC 15 min,并轻摇。盛液的Coplin 广口瓶外裹以铝箔以避光,如盖玻片不易松动,应小心去除,重复洗涤2次。

        3.  吸去载玻片上残余溶液,在载玻片上加50 μl 的1~3 μg/ml 生物素酰化抗亲和素抗体,盖以22 mm2 大小的Parafilm 膜,置加湿盒中,湿盒外裹以铝箔,放37℃温育30 min。

        4.  取掉Parafilm 膜,在0.1%Triton X-100/4×SSC中轻摇洗涤15 min。
         
        5.  吸去玻片上残液,加50 μl 生物素信号放大溶液,盖以Parafilm 膜。放在裹以铝箔的加湿盒中,于37℃温育30 min。

        6.  移去Parafilm 膜,并以0.1%Triton X-100/4×SSC洗涤15 min。然后以4×SSC洗涤15 min,洗涤时应轻轻摇动。
         
        7.  复染,加盖玻片,并于显微镜下现察(见“荧光原位杂交实验”基本方案,步骤9~12)。

        来源:丁香实验

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