原理
有时需要得到仅在DNA片段的内部存在的部分限制性位点切割产生DNA，这在用待克隆片段内部存在的限制酶切位点进行克隆和构建酶切图谱时特别有用。
材料与仪器
步骤
1. 配制100 ul 含DNA和1x限制酶缓冲液的反应混合物。
2. 将反应混合物加入反应管中，其中管1加30 ul；管2~管4各加20ul；管5加10 ul， 置于冰浴。
3. 加入所选用的酶至管1（3~10 U/ug DNA），轻弹管壁混匀，置于冰浴。
4. 使用不同的吸头，从管1中取10 ul 加入到管2，快速混匀，置于冰浴。
5. 依次连续稀释，从管2到管3，管3到管4，管4到管5，最后每个管的体积均为20 ul。
6. 每个小管在合适温度温育15 min 后终止反应。
7. 进行电泳分析，或进一步酶切处理。
5. 依次连续稀释，从管2到管3，管3到管4，管4到管5，最后每个管的体积均为20 ul。
6. 每个小管在合适温度温育15 min 后终止反应。
7. 进行电泳分析，或进一步酶切处理。
来源：丁香实验
