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        煮沸法

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        一、实验步骤

        1.  接种一个单菌落于5 ml 培养基中,于37℃培养至饱和状态。

        2.  取1. 5 ml 菌液离心20 s 加入300 ul 200 ug 溶菌酶的STET溶液,在旋涡混合器 上振荡混匀,冰上放置30 s~10 min。
         
        3.  将管放入沸水中(100℃)1~2 min 离心15~30 min,吸出上清移入一个新的微量离心管中。
         
        4.  加入200 ul预冷的异丙醇,于-20℃放置15~30 min。

        5.  离心5 min,弃上淸,真空干燥。
         
        6.  沉淀溶于50 ul TE缓冲液中,保存,取进行限制性酶切分析。

        二、质粒DNA保存

        1.  短时间保存可将选择培养基上的菌落保存于℃;长时间保存可将菌液-70℃保存于甘油或DMSO溶液中。

        2.  从保存在选择平板上挑取菌落进行培养,并通过限制酶分析检测质粒。

        3.  溶于TE缓冲液的质粒DNA可在4℃短时间保存,并可于-20℃或-70℃长时间保存。

        来源:丁香实验

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