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        碱裂解小量制备法

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  接种一个单菌落于5 ml 无菌LB培养液中,在37℃培养至饱和状态(OD600≈4)。
         
        2.  取1.5 ml 培荞液离心20 s 沉淀用100 ul 溶液重悬并于室温静置5 min。

        3.  加入200 ul NsOH/SDS溶液,混匀。于冰上放置5 min。
         
        4.  加入150 ul 乙酸钾溶液,在旋涡混合器上搌荡2 s,于冰上放置5 min。
         
        5.  离心3  min然后吸取0.4 ml 上清液移入干净的微量离心管中,加0.8 ml  95%乙醇,于室温静置2 minI。

        6.  室温离心3 min ,用1 ml 70%的酒精清洗沉淀,然后真空干燥。

        7.  沉淀用30 ul TE缓冲液重溶,保存,取2.5~5 ul进行酶切分析。
         

        来源:丁香实验

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