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        瑞氏-吉姆萨混染法

        相关实验:光学显微镜检测肿瘤细胞形态实验

        最新修订时间:

        原理

        吉姆萨染液由天青,伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。
         
        1)嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结果,染粉红色,称为嗜酸性物质;
        2)细胞核蛋白和淋巴细胞 胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物质;
        3)中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
         
        PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均分布蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液PH而定,在偏酸性环境中下在电荷增多,易与伊红结合,染色偏红;在偏碱性环境中负电荷增多,易与美蓝或天青结合,染色 偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感,染色用玻片必须清洁,无酸碱污染。配制必须用优质甲醇,稀释染色必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致各种细胞染色反应异常,以致识别困难,甚至造成错误。
         
        用途:适合大多数细胞组织的染色,包括血涂片、各种组织石蜡切片、冰冻切片、以及各种培养细胞。染色体显带、多种微生物的鉴别染色和细胞凋亡的检测等。

        材料与仪器

        步骤

        一、试剂配制
         
        1.  瑞氏染液配制
         
        称瑞氏染料0.1 g于研钵,少量多次加入AR级甲醇至完全溶解,后补充至60 ml棕色瓶密封保存,可加3 ml甘油防止挥发。
         
        2.  吉姆萨染液配制
         
        0.1 g吉姆萨染料放入有6.6 ml甘油的圆锥烧瓶内,56度,水浴90-120 min,当染料与甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇,充分摇匀后过滤,棕色瓶室温可保存一周。
         
        二、染色

        1.  收集细胞制成悬液后涂片、晾干。悬浮培养细胞离心收集。贴壁细胞可直接培养在载玻片上。组织取材需机械零散。

        2.  固定:以甲醇固定10 min.
         
        3.  液化精液2 000/ rmin 离心10 min,等渗盐水洗3遍,涂片后自然干燥。
         
        4.  临用前,瑞、吉染液按10:1混合,染色30-60 s。
         
        5.  加等量PBS(pH6.9),再染10 min。
         
        6.  自来水冲洗,自然干燥后,即可镜检,也可直接香柏油兼做透明与封片。

        注意事项

        1. 整个操作动作要尽量轻柔,勿用力吹打细胞。


        2. 操作时注意避光,反应完毕后尽快在一小时内检测。

        来源:丁香实验

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