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        紫外分光光度法(蛋白质浓度测定)

        相关实验:蛋白质浓度测定

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        取试管7支,各管混匀,盛于石英杯中,用紫外分光光度计,以空白管调节零点,分别于280nm、260nm波长下测定各管光密度。 (一)直接根据标准液与待测液的光密度值(OD280nm),或从标准曲线,求得样本蛋白质含量。 以标准管各管光密度值为纵坐标,以蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线,然后根据测定管光密度值,直接查标准曲线求得样本中蛋白质的含量。 1. 选一种与待测样本蛋白质氨基酸组成相近似的蛋白质纯品,用生理盐水稀释至浓度为lmg/m1,作为稀释标准蛋白质溶液。 2.用生理盐水稀释待测样本蛋白质至浓度约为lmg/m1,即为稀释样本蛋白质溶液。 (二)利用经验公式直接计算样本蛋白质含量, 准确吸取血清样本0.1ml,置于50ml容量瓶中,用生理盐水稀释至刻度,即500倍稀释,在280nm和260nm两处波长分别测得光密度值、再按下列公式计算。 1、OD280/OD260<1.5时,用Lowry-Kalokar公式:样本蛋白质含量(mg/m1)=1.45OD280一0.74OD260 2、OD280/OD260﹥1.5时,用Lamber-Beer定律计算:样本蛋白质含量(mg/m1)= OD280/K×L=(OD280/6.3×1)×10g/L 本实验样品:牛血清白蛋白E1%cm=6.3(100ml/cm.g) K:克分子消光系数;E1%cm:百分比吸光度的吸光系数;

        注意事项

        不同蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量有差异,故标准管与测定管的蛋白质氨基酸组成应相似,以减小误差。

        来源:丁香实验

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