核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶活性的测定

核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶活性的测定的基本原理是核酮糖-1，5-二磷酸梭化酶催化 1 分子的核酮糖-1， 5-二磷酸（RuBP） 与 1 分子的 CO₂ 结合，产生 2 分子的 3-磷酸甘油酸 （PGA），PGA 可通过 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使 NADH 氧化，其反应如下：

由上式可知 1 分子 CO₂ 被固定，就有 2 分子 NADH 被氧化。因此，根据 NADH 氧化的量就可计算核酮糖-1，5-二磷酸梭化酶的活性，而由 340 nm 吸光度的变化可计算 NADH 氧化的量。为了使 NADH 的氧化与 CO₂ 的固定同步，从而需要加入磷酸肌酸（Cr~P）和磷酸肌酸激酶的 ATP 再生系统。

核酮糖-1，5-二磷酸加氧酶催化将 O₂ 加在核酮糖-1，5-二磷酸 （RuBP）的 C-2 位置上，生 成 1 分子的磷酸乙醇酸和 3-磷酸甘油酸。Rubisco 加氧反应是典型的单加氧反应，将 CO₂ 的 2 个氧原子掺入 H₂O 和磷酸乙醇酸中，因而加氧酶的活性可用氧电极法以氧的消耗来确定。另外，RuBP 在有 MS²⁺ 离子参与的酶的加氧反应中首先被烯醇化，这时 RuBP 的 C-2 位置被调整为 1 个负碳离子，当与分子氧反应后形成过氧化离子，然后电子又从氧回到烯醇化的 RuBP 再生成负碳离子并产生单线态氧，而这单线态氧可以利用发光光度计来检测。发光光 度计法测定加氧酶活性比氧电极法灵敏度高 70 倍。但如果要测定 Rubisco 的加氧活性的绝对值，则要用氧电极法先行标定。