磷酸化蛋白鉴定实验

这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串联质谱对磷酸肽进行鉴定和测序（见 24. 3. 3 )；使用稳定同位素标记的磷酸肽的相对定量分析（见 24.3.4 )；用液相色谱-质谱（LC- MS) 确定蛋白磷酸化率（见 24.3. 5 ) 。 3.1 细胞亚组分的胰

1、步骤见 Western blot；2、步骤见 ELISA；3、步骤见原 protocol。

蛋白质磷酸化属于蛋白质翻译后修饰，是细胞信号转导过程中常见的一种修饰方式，常常用来调节蛋白的活性、构象和相互作用等生物学功能。真核生物中常见的磷酸化发生于丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和组氨酸残基上。研究蛋白的磷酸化状态对于理解细胞生物学过程具有重要意义。检测蛋白质磷酸化水平的方法有蛋白质免疫印迹（Western blotting）ELISA 酶联免疫反应、细胞免疫化学（ICC）、流式细胞术和磷酸化抗体芯