• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        收藏
        wx-share
        分享

        λ噬菌体DNA限制性内切酶图谱分析

        实验分类:

        遗传学实验

        最新修订时间:

        简介

        λ噬菌体是分子遗传学研究中常用的生物材料,其DNA的酶切片段常作为测定DNA分子量大小的标准物。限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异碱基序列的DNA水解酶,主要存在于原核细胞中。根据这些酶的差别,可分别命名为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。Ⅰ型和Ⅲ型限制性内切酶在同一蛋白分子中兼有修饰(甲基化)作用及依赖于ATP的限制(切割)活性,但不能在特异序列中降解DNA,因此在它的酶图谱分析与分子克隆中很少应用,主要应用的是Ⅱ型酶,因为这种类型的酶能识别高度特异性的4~6个核苷酸序列,切割后产生5′端突出的互补单链末端(粘性末端)或没有单链突出的平端(或称钝端)。这两种末端均可用T4连接酶进行连接。虽然DNA平端连接效率较粘性末端效率低,但其具有普遍适应性,因此成为分子生物学常用的一种DNA连接策略。来源:《遗传学实验教程》

        来源:丁香实验

        操作方法

        基本方案

        (一)λDNA-EcoRⅠ酶解反应1.取一无菌新Eppendorf管依次加入16μL无菌去离子水、2μL 10×EcoRⅠ缓冲液、1μL EcoRⅠ酶,最后加入λDNA1μL(总反应体积为20μL),此为小量酶解反应体系,主要用于酶切鉴定。如需制备基因片段,可选用大量酶解反应体系,反应体积为50~100μL,相应扩大各种试剂的加入量。2.轻轻地将Eppendorf管中反应试剂混合均匀,置37℃水浴

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序