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基于细胞膜通透性改变检测细胞凋亡
实验分类：
细胞实验
最新修订时间：
简介
细胞凋亡是区别于细胞坏死的一种细胞死亡形式，处于该状态的细胞在形态学、生物化学和分子生物学上都具有独特的性质。根据细胞膜通透性改变，如测定标记蛋白、标记核酸和标记酶的释放以及染料进入细胞等，可检测细胞凋亡。
目前，基于细胞膜通透性改变检测细胞凋亡的方法主要有 1 种：磷酸酰丝氨酸外化的流式细胞术检测细胞凋亡。
原理
磷酸酰丝氨酸外化的流式细胞术检测细胞凋亡的基本原理是磷脂酰丝氨酸（SP）分子通常只存在于细胞膜的内侧，在凋亡早期，细胞膜中 PS 分子自脂质双分子层的内层翻转至外层，形成 PS 外化。
膜联蛋白 V（annexin V）是一种分子质量为 35～36kDa 的 Ca2＋ 依赖性磷脂结合蛋白，对 PS 高度亲和，可通过外化的 PS 结合到凋亡的细胞表面。共轭有荧光染料异硫氰酸荧光素（FITC）的膜联蛋白 V（annexin V FITC）同样保留了对 PS 的高度亲和，可以用作探针，对凋亡细胞进行流式细胞术分析。
来源：丁香实验团队
操作方法
由于 PS 外化同样存在于失去膜完整性的凋亡晚期细胞和坏死细胞，所以在对凋亡细胞进行流式细胞术分析时，同时应用只对失去膜完整性的细胞染色的活体染料，如碘化丙锭（PI），以区分早期凋亡细胞和凋亡晚期细胞及坏死细胞。细胞发生凋亡时，膜上的 PS 外露早于 DNA 断裂发生，因此膜联蛋白 V 联合 PI 染色法检测早期细胞凋亡较 TUNEL 法更为灵敏。又因为膜联蛋白 V 联合 PI 染色不需固定细胞，
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