MSCs 培养物的扩增和冻存实验

(a)检査所得的MSCs。如果培养物中小的、贴壁、纺锤形的成纤维细胞样细胞汇合至60%时，对其进行处理。如果单层细胞稀疏,继续润洗和更换培养基。(b)按如下步骤消化单层细胞：用20 mL预热的PBSA润洗单层细胞后，加人5mL胰蛋白酶/EDTA。将培养皿置于37℃ 2min，在1O×放大倍数视野下观察单层细胞。贴壁细胞应正从塑料培养瓶上脱落。将培养皿置于37℃ 2min,再次观察。重复观察直到90

(a)所得的MSC细胞悬液，500g离心10min。(b)在冻存管上标记细胞来源、日期和细胞代数。(c)用预热的冻存液以1X106个细胞/ml的密度重悬沉淀，每个冻存管中加入1ml,分装成若干管。在DMSO存在的情况下，勿使MSCs在室温放置20min以上。(d)向Cryo-1℃冻存容器内装人异丙醇至刻度线，将冻存管置于容器内。(e)将容器置于-80℃至少15h。(f)将冻存管转移至液氮，至少可保

(a)准备2个15 cm培养皿，加人25 ml预热的CCM。(b)从液氮罐中取出所需的冻存管。将冻存管放人37℃水浴箱中解冻。此步骤需小心操作，戴好面罩。因为储存时出现问题，解冻的冻存管可能爆裂。(c)细胞悬液融化后，取450μL加人每个培养皿中，在37℃，5%C02培养箱中至少培养18 h。(d)第二天，用30 ml预热的PBSA润洗细胞，然后加人30 ml预热的CCM。(e)进行传代处理