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        TUNEL 分析实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        组织切片的 TUNEL 染色

        1. 取下组织,立即用新制备的 4% 甲醛固定,室温过夜。用多聚甲醛制备 4% 的甲醛溶液,在 100 ml 水中加 8 g 多聚甲醛,在通风橱中加热至 50~60℃,加几滴 1 mol/L NaOH 使固体全部溶解。多聚甲醛全部溶解后,将溶液放冰上,迅速冷却至室温。加 100 ml pH 7.2 的 2X PBS,过滤固定液。甲醛储存液应在每次实验前新配。 2. 通过 50%、70%、80%、

        TUNEL 染色的流式细胞计量术分析

        1. 凋亡诱导之后,200 g 离心 5 分钟收集 1X106 悬浮细胞,用冷的 PBS 洗 2 次,重复离心。 2. 用 2 ml 2% 的甲醛 PBS 溶液固定细胞沉淀,室温下在水平摇床上孵育 30 分钟。 3. 200 g 离心 5 分钟沉淀细胞,用 PBS 洗 1 次。重复离心。 4. 用 500 μl 0.1% Triton X-100,0.1% 柠檬酸钠溶液 4℃ 孵育 2 分钟

        贴壁细胞的 TUNEL 染色

        1. 用无菌镊子将一无菌盖玻片放入 35 mm 培养皿中。 2. 将大约 1X104 细胞接种于无菌盖玻片上,培养 24~48 小时。凋亡诱导时,细胞铺满不超过 80%。如细胞贴壁不太好,可以用纤连蛋白、聚赖氨酸或血清预处理盖玻片,以使细胞更好地贴壁生长。 3. 诱导凋亡后,用 pH 7.2 的 PBS 轻轻洗细胞 1 次,不要除去垂死细胞,用冰冷的甲醇固定 10 分钟。 4. 室温空气干燥

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