材料与仪器
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 |
步骤
1. 用无菌镊子将一无菌盖玻片放入 35 mm 培养皿中。
2. 将大约 1X104 细胞接种于无菌盖玻片上，培养 24~48 小时。凋亡诱导时，细胞铺满不超过 80%。如细胞贴壁不太好，可以用纤连蛋白、聚赖氨酸或血清预处理盖玻片，以使细胞更好地贴壁生长。
3. 诱导凋亡后，用 pH 7.2 的 PBS 轻轻洗细胞 1 次，不要除去垂死细胞，用冰冷的甲醇固定 10 分钟。
4. 室温空气干燥玻片 5 分钟，在 pH 7.2 的 PBS 中温育 10 分钟重新水合。
5. 按上述方法进行 TUNEL 反应。将合适的 Parafilm 膜放入温室，膜上加 50 μl TdT 反应混合液，放盖玻片，细胞朝下在反应液上。37℃ 孵育 1 小时。
6. 从室温中取出盖玻片，放回 35 mm 培养皿中。用 PBS 洗细胞 3 次，用 FlooroGuard 固定液固定到载玻片上。
2. 将大约 1X104 细胞接种于无菌盖玻片上，培养 24~48 小时。凋亡诱导时，细胞铺满不超过 80%。如细胞贴壁不太好，可以用纤连蛋白、聚赖氨酸或血清预处理盖玻片，以使细胞更好地贴壁生长。
3. 诱导凋亡后，用 pH 7.2 的 PBS 轻轻洗细胞 1 次，不要除去垂死细胞，用冰冷的甲醇固定 10 分钟。
4. 室温空气干燥玻片 5 分钟，在 pH 7.2 的 PBS 中温育 10 分钟重新水合。
5. 按上述方法进行 TUNEL 反应。将合适的 Parafilm 膜放入温室，膜上加 50 μl TdT 反应混合液，放盖玻片，细胞朝下在反应液上。37℃ 孵育 1 小时。
6. 从室温中取出盖玻片，放回 35 mm 培养皿中。用 PBS 洗细胞 3 次，用 FlooroGuard 固定液固定到载玻片上。
来源：丁香实验
