• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        收藏
        wx-share
        分享

        目的基因在真核系统中的表达及细胞内的定位实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        本实验是将氯化钙,DNA和磷酸缓冲液混合,形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒(沉淀),磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质,并以GFP标记分子最常作为标记物来追踪结合分子的表达水平和定位,或作为检测环境变化或蛋白相互作用的指标。内容来源:中国医科大学实验指导手册。

        来源:丁香实验

        操作方法

        磷酸钙法瞬时转染法

        1. 转染的前一天在35 mm培养皿中植入细胞(约1×106个细胞),使得第二天转染时细胞汇合率达到50-80%; 2. 转染前1-4小时,换成不含血清和双抗的培养基; 3. 在1. 5 ml无菌的离心管中混合下列药品: 15. 5 μl 2 MCaCl2,最多10 μg质粒DNA,补加TE(pH8. 0)至125 μl; 4. 在无菌的35 mm平皿中

        荧光法

        取转染后24-72 hrs的细胞,置于倒置荧光显微镜下观察含有目的基因的EGFP融合蛋白的亚细胞定位。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序