细胞实验

用适量的超纯水将包装中的干粉全部溶解：将容器放到磁力搅拌器上，边搅拌边加干粉。当所有的成分完全溶解后，培养基应立即过滤不能放置，否则会产生沉淀或有微生物污染。当最后的成分（如，谷氨酰胺、NaHCO3或血清）加完后，最好调整pH 。

比色法可测定在任何一个时间点上的总蛋白量。在一定时期内连续观察可以用来测 定净蛋白质的累积或丟失（也就是合成的蛋白质—降解的蛋白质）。此时蛋白质合成 可以用放射标的氨基酸与细胞孵育来进行液闪测定，诸如 3H -亮氨酸或 35S-甲硫氨酸，所测定的是掺入到 106 个细胞或是某一段时间内每克蛋白质中的放射活性。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

配制全成分培养基时，准备好几个盛有无菌去离子蒸馏水的容器，一个容器的容量至少要够用1~3 周。加浓缩培养基和其他成分，调整pH , 直接使用或放回冰箱。

溶解蛋白质，与染料混匀，10 min后阅读O.D.。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

固定阻滞于分裂中期的细胞，在低渗液中膨胀，将细胞滴在载玻片上，染色，观察 [ Rothfels and Siminovitch，1958；Rooney and Czepulkowski，1986 ] 。

不断地搅拌将干粉溶解，调整至终体积，检测 pH 和传导率，按预订量分装进行高压灭菌。

在缓冲液中匀浆细胞或组织，继用超声处理。以一定量的细胞悬液与Hoechst33258混匀，测定其荧光。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

打开显微镜，校准光路。在标本有关区域聚焦。检査相机与电脑的连接，将光导向相机，聚焦，保存图像。

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

用胰蛋白酶消化单层培养，或从悬浮培养中取样；准备一张盖玻片，将细胞加到血细胞计数板的小室内。在显微镜下计数细胞，计算细胞浓度。 来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

培养物用甲醇固定，直接用未稀释的 Giemsa 液进行染色，然后1：10 稀释染液，清洗培养物，在潮湿状态下观察。

本实验来源于：动物细胞培养——基本技术指南（第五版）

将培养物放在显微镜的载物台上，打开电源，选择合适的镜头，聚焦于标本。如果必要的话，将聚光器和相差环调节在中心。

细胞层（buffy coat）或另一种混合细胞悬液同与抗体连接的微珠混合，稀释后放人一个磁性分离柱中。与微珠结合的细胞会贴到柱子的侧壁上，而未结合磁珠的细胞则流过柱子。将分离柱从磁场移开，结合微珠的细胞就从柱子上释放，用针栓从柱中收集。

将细胞依次置于一系列浓度的 MTX 中几周，定期更换含有相同药物浓度的新鲜培养基。挑选出其中只有一小部分细胞存活并且形成集落的培养瓶继续培养。将选出的这些细胞置于原浓度或高于原浓度 2~10倍的 MTX 中继续培养，直至得到理想的抗药性。

用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落，移至培养瓶或多孔板的培养孔中。

胰蛋白酶消化后，用 EDTA 分散从皮肤片分离的表皮片，然后用添加 bFGF（FGF-2）的无血清培养液培养。

将培养瓶倒置放于 X 射线机或 60Co 源下，用铅块遮蔽需要的集落。

肿瘤的培养细胞及体外转化的细胞，都能表现出生长控制的异常，例如，更髙的饱 和密度、在琼脂中形成集落以及均质细胞生长成汇合的单层。这些细胞系表现出 对血清浓度及生长因子的依赖性较低，通常具有更髙的克隆形成率。同时推测，细胞获 得一定程度的自主生长是由于癌基因的过度表达或抑制基因的缺失。生长控制通常是自 分泌式的，如细胞分泌促分裂素。为此，细胞通常具有受体或者表达受体，或其信号传 导处于永久激活或不受

将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24孔或12孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2的培养瓶内。