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甲状腺相关眼病动物模型
实验分类：
实验动物
别名：
Animal models of thyroid-associated ophthalmopathy
最新修订时间：
简介
甲状腺相关眼病动物模型，英文名是 Animal models of thyroid-associated ophthalmopathy。
目前，用于甲状腺相关眼病动物模型的方法主要有 3 种：TSHR 基因转染的腺病毒免疫建立 Graves 眼病的动物模型、TSHR 活化的脾细胞免疫建立 Graves 眼病的动物模型和 TSHR 质粒免疫建立 Graves 眼病的动物模型。
早在 1936 年，Smelser 就采用垂体提取物联合甲状腺切除术诱发豚鼠突眼，实验组 26 只豚鼠中 23 只发生严重的突眼，与对照组比较，实验组鼠眼眶内容物重量增加 40%。但由于该模型与 TAO 发病患者一般甲状腺完整或部分甲状腺功能正常不符，难以用于进一步的研究。
后来采用的 TAO 制模途径包括：
① 同源的促甲状腺激索受体（hyoid-timulating hormone receptor, TSHR）肽免疫；
② TSHR 肽转染的原核细胞免疫、真核细胞免疫；
③ TSHR 基因免疫；
④ TSHR 和 G2s 基因联合免疫；
⑤ 免疫细胞转导免疫及激活的 T 细胞转导免疫等。
理想的 TAO 模型应该具备如下几个或所有特征：
① 血清甲状腺激素水平升高和（或）促甲状腺激素（TSH）水平降低；
② 存在有活性的促甲状腺受体（TSHR）抗体，至少有促甲状腺激素结合抑制性免疫球蛋白（TBII），最好是甲状腺刺激性抗体（TSAb）；
③ 甲状腺有相应的病理改变；
④ 淋巴细胞性甲状腺炎；
⑤ 具有甲亢的临床特征, 如体重降低；
⑥ 雌性较雄性动物更易发病；
⑦ 类似于 TAO 的眼部改变，如眼外肌（EOM）结构的破坏、水肿、淋巴细胞浸润和眶脂肪堆积。
原理
根据实验方法不同，对应的原理也有所不同：
TSHR 基因转染的腺病毒免疫建立 Graves 眼病的动物模型的基本原理：
以腺病毒为载体, 将 TSHR 基因转染到小鼠体内, 造成自身免疫反应, 导致眼眶和甲状腺病变。
TSHR 活化的脾细胞免疫建立 Graves 眼病的动物模型的基本原理：
在前述模型的基础上，从脾脏取出活化的免疫细胞，再次进行免疫注射造模，其免疫特征呈放大效应。
TSHR 质粒免疫建立 Graves 眼病的动物模型的基本原理：
通过质粒为载体, 将 TSHR 转染到动物体内。
应用
甲状腺相关眼病动物模型的常用应用领域如下：
（一）应用于免疫机制的研究。
（二）应用于 TAO 病理改变的试验研究。
来源：丁香实验团队
操作方法
(1) 利用含 TSHR 的 A 亚单位的穿梭质粒构建腺病毒表达的 TSHR 的 A 亚单位。穿梭质粒 pHMCMVTSHR289 用常规 CaCl2 法转化 DH5ax 大肠埃希菌感受态细胞。(2) 重组质粒 pAdHM4CMVTSHR 构建：穿梭质粒 pHMCMVTSHR 和骨架质粒 pAdHM4 均由酶 I-Ceu/PI-Sce 双酶切后，转入 E.coli BJ5183 中, 使两者在其中
TSHR 活化的脾细胞免疫建立 Graves 眼病的动物模型(1) 质粒抽提及定量：大量扩增宿主菌 E.coli DH5α，用质粒抽提试剂盒提取足量质粒 DNA，经紫外分光光度计纯度鉴定及定量后，用磷酸盐缓冲液调整为 100 μg/200 ul。(2) 基因免疫：免疫前 5 天行预处理，在小鼠胫前肌分 3 点注射 PBS 液 100 μl，然后在小鼠胫前肌相应部位分别注射 100 μg 重组质粒 pcDNA311/hTSHR，免疫后第 3、6 周加强免疫两
TSHR 质粒免疫建立 Graves 眼病的动物模型(1) 质粒抽提及定量：大量扩增 DH5α，用质粒抽提试剂盒提取足量质粒 DNA，经紫外分光光度计纯度鉴定及定量后用磷酸盐缓冲液调整为 100 ug/100 ul。(2) 质粒 DNA 免疫：在小鼠胫前肌相应部位分别注射 100 μg 重组质粒 pcDNA311/hTSHR，免疫后第 3、6 周加强免疫两次。18 周后处死所有小鼠。观察指标：甲状腺和眼眶组织进行病理学组织检查，甲状腺和眼眶组织分别
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